Анализ межиндивидуальной вариации и референтные интервалы показателей теста генерации тромбина при использовании различных технологий

Актуальность. Тест генерации тромбина (ТГТ) как интегральный метод анализа каскада активации естественных про- и антикоагулянтов имеет практическое значение в оценке риска тромботических состояний и кровотечений. Однако применение метода ограничивает отсутствие стандартизации. Цель. Определить референтные интервалы внутри лаборатории и оценить межиндивидуальную вариацию показателей ТГТ для различных технологий. Материалы и методы. В исследование вошли 20 доноров. ТГТ проведен с помощью двух технологий: калиброванной автоматизированной тромбограммы на полуавтоматическом флуориметре (Технология 1) и автоматического измерения ГТ на коагулометре (Технология 2). Рассчитывались стандартные показатели ТГТ. Полученные результаты нормировались относительно пулированной нормальной плазмы. Результаты. Параметры тромбограммы показали высокий CVG (коэффициент межиндивидуальной вариации): от 14 до 32 % для Технологии 1 и от 7 до 36 % для Технологии 2. CVG значимо не менялся после нормализации данных ТГТ. Отмечены значимые различия ключевого показателя ЕТР (эндогенный тромбиновый потенциал). Референтные интервалы для Технологии 1 составили: ЕТР 1478,0–2595,0 нмоль/мин и пиковая концентрация тромбина (Peak thr.) 221,6–412,0 нмоль. РИ для Технологии 2: ЕТР 2451,00–3161,00 нмоль/мин и Peak thr. 161,60–479,30 нмоль. Заключение. Сравнение двух лабораторных технологий ТГТ выявило высокую межиндивидуальную вариацию. В связи с различиями в методиках постановки ТГТ, абсолютные значения отдельных параметров статистически значимо различаются за исключением LT. Таким образом, параметры ТГТ индивидуальны, и использование исследования в динамике для каждого конкретного индивида, вероятно, имеет большую информативность, чем применение РИ, полученных в общей популяции. Динамическое наблюдение за пациентом необходимо выполнять с применением одной технологии.

1. Macfarlane RG, Biggs R. A thrombin generation test; the application in haemophilia and thrombocytopenia. J Clin Pathol. 1953; 6(1):3−8. DOI: 10.1136/jcp.6.1.3.

2. Hemker HC, Giesen P, AlDieri R, et al. The calibrated automated thrombogram (CAT): a universal routine test for hyper- and hypocoagulability. Pathophysiol Haemost Thromb. 2002; 32(5−6):249−253. DOI: 10.1159/000073575.

3. Depasse F, Binder NB, Mueller J, et al. Thrombin generation assays are versatile tools in blood coagulation analysis: A review of technical features, and applications from research to laboratory routine. J Thromb Haemost. 2021; 19(12):2907−2917. DOI: 10.1111/jth.15529.

4. Loeffen R, Kleinegris MC, Loubele ST, et al. Preanalytic variables of thrombin generation: towards a standard procedure and validation of the method. J Thromb Haemost. 2012; 10(12):2544−2554. DOI: 10.1111/jth.12012.

5. Wagner L, Luddington R, Wiens L, Grigorov A, Hrachovinová I, Binder B. First Experiences with the Measurement of Thrombin Generation (TGA) on the Ceveron Alpha in the Routine Lab. Blood. 2008; 112(11):4089–4089. DOI: 10.1182/blood.V112.11.4089.4089.

6. Pfrepper C, Behrendt LC, Bönigk H, et al. Influence of direct oral anticoagulants on thrombin generation on Ceveron TGA. Int J Lab Hematol. 2022; 44(1):193−201. DOI: 10.1111/ijlh.13721.

7. Tripodi A. Thrombin Generation Assay and Its Application in the Clinical Laboratory. Clin Chem. 2016; 62(5):699−707. DOI: 10.1373/clinchem.2015.248625.

8. Binder NB, Depasse F, Mueller J, et al. Clinical use of thrombin generation assays. J Thromb Haemost. 2021; 19(12):2918−2929. DOI: 10.1111/jth.15538.

9. Perrin J, Depasse F, Lecompte T, et al. Large external quality assessment survey on thrombin generation with CAT: further evidence for the usefulness of normalisation with an external reference plasma. Thromb Res. 2015; 136(1):125−130. DOI: 10.1016/j.thromres.2014.

10. Dargaud Y, Wolberg AS, Gray E, et al. Proposal for standardized preanalytical and analytical conditions for measuring thrombin generation in hemophilia: communication from the SSC of the ISTH. J Thromb Haemost. 2017; 15(8):1704−1707. DOI: 10.1111/jth.13743.

11. Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI). Defining, Establishing, and Verifying Reference Intervals in the Clinical Laboratory - Approved Guideline - Third Edition. Clinical and Laboratory Standards Institute. Wayne: PA, USA, 2010.

12. Melnichnikova OS, Zhilenkova YI, Zolotova EA, et al. Thrombin generation test as an integral analysis of the hemostasis system: technical capabilities and application in laboratory practice. Russ J Pers Med. 2022; 2(3):119–128. DOI: 10.18705/2782-3806-2022-2-3-119-128.

13. de Laat-Kremers RMW, Ninivaggi M, Devreese KMJ, et al. Towards standardization of thrombin generation assays: Inventory of thrombin generation methods based on results of an International Society of Thrombosis and Haemostasis Scientific Standardization Committee survey. J Thromb Haemost. 2020; 18(8):1893−1899. DOI: 10.1111/ jth.14863.

14. Rudez G, Meijer P, Spronk HM, et al. Biological variation in inflammatory and hemostatic markers. J Thromb Haemost. 2009; 7(8):1247−1255. DOI: 10.1111/j.1538- 7836.2009.03488.x.

15. Mairesse A, Bayart JL, Desmet S, et al. Biological variation data and analytical specification goal estimates of the thrombin generation assay with and without thrombomodulin in healthy individuals. Int J Lab Hematol. 2021; 43(3):450−457. DOI: 10.1111/ijlh.13388.

16. Wu J, Zhao HR, Zhang HY, et al. Thrombin generation increasing with age and decreasing with use of heparin indicated by calibrated automated thrombogram conducted in Chinese. Biomed Environ Sci. 2014; 27(5):378−384. DOI: 10.3967/bes2014.063.

17. Haidl H, Cimenti C, Leschnik B, et al. Agedependency of thrombin generation measured by means of calibrated automated thrombography (CAT). Thromb Haemost. 2006; 95(5):772−775.

18. Kausche LE, Adler W, Zimmermann R, et al. Thrombin Generation in Fresh and Frozen-Thawed Platelet Poor Plasma — Is there a Difference? Clin Lab. 2020; 66(6). DOI: 10.7754/Clin.Lab.2019.190834.

19. Mori F, Genuardo C, Nannizzi S, et al. Intra— and interassay variations of two thrombin generation methods. Int J Lab Hematol. 2021; 43(4):O218—O220. DOI: 10.1111/ijlh.13524.

20. Chandler WL, Roshal M. Optimization of plasma fluorogenic thrombin-generation assays. Am J Clin Pathol. 2009; 132(2):169−179. DOI: 10.1309/ AJCP6AY4HTRAAJFQ

21. Kintigh J, Monagle P, Ignjatovic V. A review of commercially available thrombin generation assays. Res Pract Thromb Haemost. 2017; 2(1):42−48. DOI: 10.1002/ rth2.12048.

22. Dargaud Y, Wolberg AS, Luddington R, et al. Evaluation of a standardized protocol for thrombin generation measurement using the calibrated automated thrombogram: an international multicentre study. Thromb Res. 2012; 130(6):929−934. DOI: 10.1016/j. thromres.2012.07.017.