transmedТрансляционная медицинаTranslational Medicine2311-44952410-5155Almazov National Medical Research Centre, Saint Petersburg, Russia10.18705/2311-4495-2022-9-5-78-86transmed-723Research ArticleМЕТОДОЛОГИЧЕСКАЯ СТАТЬЯMETHODICSАнализ межиндивидуальной вариации и референтные интервалы показателей теста генерации тромбина при использовании различных технологийAnalysis of inter-individual variation and reference intervals of thrombin generation test indicators using different technologiesЗолотоваЕ. А.ZolotovaE. A.

Золотова Екатерина Алексеевна, аспирант кафедры лабораторной медицины и генетики

ул. Аккуратова, д. 2, Санкт-Петербург, 197341

Ekaterina A. Zolotova, MD, PhD student of Department of Laboratory Medicine and Genetics

Akkuratova str., 2, Saint Petersburg, 197341

katerinazolotova1@gmail.comМельничниковаО. СMelnichnikovaO. S.

Мельничникова Ольга Сергеевна, к.м.н., старший научный сотрудник научно-исследовательской группы кардиоонкологии

Санкт-Петербург

Olga S. Melnichnikova, MD, PhD, Senior Researcher, Research Group of Cardio-Oncology, World-Class Research Centre for Personalized Medicine

Saint Petersburg

olga4403@gmail.comСимаковаМ. А.SimakovaM. A.

Симакова Мария Александровна, к.м.н., старший научный сотрудник научно-исследовательской лаборатории кардиомиопатий, руководитель научно-исследовательской группы кардиоонкологии

Санкт-Петербург

Maria A. Simakova, MD, PhD, Senior Researcher, Noncoronary Heart Disease Department, Head of Research Group of Cardio-oncology, Research Centre of Personolized Oncology, World-Class Research Centre for PersonalizedMedicine

Saint Petersburg

maria.simakova@gmail.comЖиленковаЮ. И.ZhilenkovaY. I.

Жиленкова Юлия Исмаиловна, к.м.н., доцент кафедры лабораторной медицины и генетики

Санкт-Петербург

Yulia I. Zhilenkova, MD, PhD, Associate Professor of Department of Laboratory Medicine and Genetics

Saint Petersburg

yuliaismailovna@mail.ruСироткинаО. В.SirotkinaO. V.

Сироткина Ольга Васильевна, д.б.н., профессор кафедры лабораторной медицины и генетики ФГБУ «НМИЦ им. В. А. Алмазова» Минздрава России; ведущий научный сотрудник лаборатории молекулярной генетики человека ФГБУ «Петербургский институт ядерной физики им. Б. П. Константинова Национального исследовательского центра «Курчатовский институт»; старший научный сотрудник отдела молекулярно-генетических и нанобиологических технологий ФГБУ ВО «Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. акад. И. П. Павлова»

Санкт-Петербург

Olga V. Sirotkina, PhD, DSc, Professor of Department of Laboratory Medicine and Genetics, Almazov National Medical Research Centre; senior researcher, PetersburgNuclear Physics Institute named by B.P. Konstantinov of National Research Centre «Kurchatov Institute»; senior researcher, Pavlov First Saint-Petersburg State MedicalUniversity

Saint Petersburg

olga_sirotkina@mail.ruВавиловаТ. В.VavilovaT. V.

Вавилова Татьяна Владимировна, д.б.н., профессор, заведующий кафедрой лабораторной медицины и генетики

Санкт-Петербург

Tatiana V. Vavilova, MD, PhD, DSс, Professor, Head of Department of Laboratory Medicine and Genetics

Saint Petersburg

vtv.lab.spb@gmail.comФедеральное государственное бюджетное учреждение «Национальный медицинский исследовательский центр имени В. А. Алмазова» Министерства здравоохранения Российской ФедерацииРоссияAlmazov National Medical Research CentreRussian FederationФедеральное государственное бюджетное учреждение «Национальный медицинский исследовательский центр имени В. А. Алмазова» Министерства здравоохранения Российской Федерации; Федеральное государственное бюджетное учреждение «Петербургский институт ядерной физики имени Б. П. Константинова Национального исследовательского центра «Курчатовский институт»; Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет имени академика И. П. Павлова» Министерства здравоохранения Российской ФедерацииРоссияAlmazov National Medical Research Centre; Petersburg Nuclear Physics Institute named by B. P. Konstantinov of National Research Centre “Kurchatov Institute”; First Pavlov State Medical UniversityRussian Federation202228122022957886Copyright © Золотова Е.А., Мельничникова О.С., Симакова М.А., Жиленкова Ю.И., Сироткина О.В., Вавилова Т.В., 20232023Золотова Е.А., Мельничникова О.С., Симакова М.А., Жиленкова Ю.И., Сироткина О.В., Вавилова Т.В.Zolotova E.A., Melnichnikova O.S., Simakova M.A., Zhilenkova Y.I., Sirotkina O.V., Vavilova T.V.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://transmed.almazovcentre.ru/jour/article/view/723

Актуальность. Тест генерации тромбина (ТГТ) как интегральный метод анализа каскада активации естественных про- и антикоагулянтов имеет практическое значение в оценке риска тромботических состояний и кровотечений. Однако применение метода ограничивает отсутствие стандартизации. Цель. Определить референтные интервалы внутри лаборатории и оценить межиндивидуальную вариацию показателей ТГТ для различных технологий. Материалы и методы. В исследование вошли 20 доноров. ТГТ проведен с помощью двух технологий: калиброванной автоматизированной тромбограммы на полуавтоматическом флуориметре (Технология 1) и автоматического измерения ГТ на коагулометре (Технология 2). Рассчитывались стандартные показатели ТГТ. Полученные результаты нормировались относительно пулированной нормальной плазмы. Результаты. Параметры тромбограммы показали высокий CVG (коэффициент межиндивидуальной вариации): от 14 до 32 % для Технологии 1 и от 7 до 36 % для Технологии 2. CVG значимо не менялся после нормализации данных ТГТ. Отмечены значимые различия ключевого показателя ЕТР (эндогенный тромбиновый потенциал). Референтные интервалы для Технологии 1 составили: ЕТР 1478,0–2595,0 нмоль/мин и пиковая концентрация тромбина (Peak thr.) 221,6–412,0 нмоль. РИ для Технологии 2: ЕТР 2451,00–3161,00 нмоль/мин и Peak thr. 161,60–479,30 нмоль. Заключение. Сравнение двух лабораторных технологий ТГТ выявило высокую межиндивидуальную вариацию. В связи с различиями в методиках постановки ТГТ, абсолютные значения отдельных параметров статистически значимо различаются за исключением LT. Таким образом, параметры ТГТ индивидуальны, и использование исследования в динамике для каждого конкретного индивида, вероятно, имеет большую информативность, чем применение РИ, полученных в общей популяции. Динамическое наблюдение за пациентом необходимо выполнять с применением одной технологии.

Background. The thrombin generation test (TGT) as an integral method for analyzing the activation cascade of natural pro- and anticoagulants is of practical importance in assessing the risk of thrombotic conditions and bleeding, however its application is limited by the lack of standardization. Objective. To define reference intervals within the laboratory and assess inter-individual variation in TGT values for different technologies. Design and methods. The study included 20 donors. TGT was performed using two technologies: a calibrated automated thrombogram on a semi-automatic fluorometer (Technology 1) and automatic measurement of GT on a coagulometer (Technology 2). Obtained results were normalized to pooled normal plasma. Results. Thrombogram parameters showed a high CVG (coefficient of interindividual variation): 14–32 % for Technology 1 and 7–36 % for Technology 2. CVG did not change significantly after normalization. Significant differences in ETP (endogenous thrombin potential) were noted. The reference intervals for Technology 1 were: ETR 1478.0–2595.0 nmol/ min and peak thrombin concentration (Peak thr.) 221.6–412.0 nmol. RI for Technology 2: ETP 2451.00–3161.00 nmol/min and Peak thr. 161.60–479.30 nmol. Conclusion. Comparison of the two laboratory TGT technologies revealed high inter-individual variation. Thus, the use of a study in dynamics for each specific individual is likely to be more informative than the use of RI obtained in the general population. Dynamic monitoring of the patient must be performed using one technology.

генерация тромбинакалиброванная автоматизированная тромбограммареферентные интервалытест генерации тромбинаcalibrated automated thrombogramreference intervalsthrombin generationthrombin generation testИсследование выполнено за счет гранта Российского научного фонда № 22-25-20132, https:// rscf.ru/project/22-25-20132. Выражаем благодарность компании «БиоХимМак» за предоставленную возможность выполнения исследования на автоматическом анализаторе Ceveron Alpha TGA.The research was carried out at the expense of the grant of the Russian Science Foundation No. 22-25-20132, https://rscf.ru/project/22-25-20132 . We would like to express our gratitude to BioHimMak for the opportunity to perform research on the Ceveron Alpha TGA automatic analyzer.ReferencesMacfarlane RG, Biggs R. A thrombin generation test; the application in haemophilia and thrombocytopenia. J Clin Pathol. 1953; 6(1):3−8. DOI: 10.1136/jcp.6.1.3.Macfarlane RG, Biggs R. A thrombin generation test; the application in haemophilia and thrombocytopenia. J Clin Pathol. 1953; 6(1):3−8. DOI: 10.1136/jcp.6.1.3.Hemker HC, Giesen P, AlDieri R, et al. The calibrated automated thrombogram (CAT): a universal routine test for hyper- and hypocoagulability. Pathophysiol Haemost Thromb. 2002; 32(5−6):249−253. DOI: 10.1159/000073575.Hemker HC, Giesen P, AlDieri R, et al. The calibrated automated thrombogram (CAT): a universal routine test for hyper- and hypocoagulability. Pathophysiol Haemost Thromb. 2002; 32(5−6):249−253. DOI: 10.1159/000073575.Depasse F, Binder NB, Mueller J, et al. Thrombin generation assays are versatile tools in blood coagulation analysis: A review of technical features, and applications from research to laboratory routine. J Thromb Haemost. 2021; 19(12):2907−2917. DOI: 10.1111/jth.15529.Depasse F, Binder NB, Mueller J, et al. Thrombin generation assays are versatile tools in blood coagulation analysis: A review of technical features, and applications from research to laboratory routine. J Thromb Haemost. 2021; 19(12):2907−2917. DOI: 10.1111/jth.15529.Loeffen R, Kleinegris MC, Loubele ST, et al. Preanalytic variables of thrombin generation: towards a standard procedure and validation of the method. J Thromb Haemost. 2012; 10(12):2544−2554. DOI: 10.1111/jth.12012.Loeffen R, Kleinegris MC, Loubele ST, et al. Preanalytic variables of thrombin generation: towards a standard procedure and validation of the method. J Thromb Haemost. 2012; 10(12):2544−2554. DOI: 10.1111/jth.12012.Wagner L, Luddington R, Wiens L, Grigorov A, Hrachovinová I, Binder B. First Experiences with the Measurement of Thrombin Generation (TGA) on the Ceveron Alpha in the Routine Lab. Blood. 2008; 112(11):4089–4089. DOI: 10.1182/blood.V112.11.4089.4089.Wagner L, Luddington R, Wiens L, Grigorov A, Hrachovinová I, Binder B. First Experiences with the Measurement of Thrombin Generation (TGA) on the Ceveron Alpha in the Routine Lab. Blood. 2008; 112(11):4089–4089. DOI: 10.1182/blood.V112.11.4089.4089.Pfrepper C, Behrendt LC, Bönigk H, et al. Influence of direct oral anticoagulants on thrombin generation on Ceveron TGA. Int J Lab Hematol. 2022; 44(1):193−201. DOI: 10.1111/ijlh.13721.Pfrepper C, Behrendt LC, Bönigk H, et al. Influence of direct oral anticoagulants on thrombin generation on Ceveron TGA. Int J Lab Hematol. 2022; 44(1):193−201. DOI: 10.1111/ijlh.13721.Tripodi A. Thrombin Generation Assay and Its Application in the Clinical Laboratory. Clin Chem. 2016; 62(5):699−707. DOI: 10.1373/clinchem.2015.248625.Tripodi A. Thrombin Generation Assay and Its Application in the Clinical Laboratory. Clin Chem. 2016; 62(5):699−707. DOI: 10.1373/clinchem.2015.248625.Binder NB, Depasse F, Mueller J, et al. Clinical use of thrombin generation assays. J Thromb Haemost. 2021; 19(12):2918−2929. DOI: 10.1111/jth.15538.Binder NB, Depasse F, Mueller J, et al. Clinical use of thrombin generation assays. J Thromb Haemost. 2021; 19(12):2918−2929. DOI: 10.1111/jth.15538.Perrin J, Depasse F, Lecompte T, et al. Large external quality assessment survey on thrombin generation with CAT: further evidence for the usefulness of normalisation with an external reference plasma. Thromb Res. 2015; 136(1):125−130. DOI: 10.1016/j.thromres.2014.Perrin J, Depasse F, Lecompte T, et al. Large external quality assessment survey on thrombin generation with CAT: further evidence for the usefulness of normalisation with an external reference plasma. Thromb Res. 2015; 136(1):125−130. DOI: 10.1016/j.thromres.2014.Dargaud Y, Wolberg AS, Gray E, et al. Proposal for standardized preanalytical and analytical conditions for measuring thrombin generation in hemophilia: communication from the SSC of the ISTH. J Thromb Haemost. 2017; 15(8):1704−1707. DOI: 10.1111/jth.13743.Dargaud Y, Wolberg AS, Gray E, et al. Proposal for standardized preanalytical and analytical conditions for measuring thrombin generation in hemophilia: communication from the SSC of the ISTH. J Thromb Haemost. 2017; 15(8):1704−1707. DOI: 10.1111/jth.13743.Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI). Defining, Establishing, and Verifying Reference Intervals in the Clinical Laboratory - Approved Guideline - Third Edition. Clinical and Laboratory Standards Institute. Wayne: PA, USA, 2010.Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI). Defining, Establishing, and Verifying Reference Intervals in the Clinical Laboratory - Approved Guideline - Third Edition. Clinical and Laboratory Standards Institute. Wayne: PA, USA, 2010.Melnichnikova OS, Zhilenkova YI, Zolotova EA, et al. Thrombin generation test as an integral analysis of the hemostasis system: technical capabilities and application in laboratory practice. Russ J Pers Med. 2022; 2(3):119–128. DOI: 10.18705/2782-3806-2022-2-3-119-128.Melnichnikova OS, Zhilenkova YI, Zolotova EA, et al. Thrombin generation test as an integral analysis of the hemostasis system: technical capabilities and application in laboratory practice. Russ J Pers Med. 2022; 2(3):119–128. DOI: 10.18705/2782-3806-2022-2-3-119-128.de Laat-Kremers RMW, Ninivaggi M, Devreese KMJ, et al. Towards standardization of thrombin generation assays: Inventory of thrombin generation methods based on results of an International Society of Thrombosis and Haemostasis Scientific Standardization Committee survey. J Thromb Haemost. 2020; 18(8):1893−1899. DOI: 10.1111/ jth.14863.de Laat-Kremers RMW, Ninivaggi M, Devreese KMJ, et al. Towards standardization of thrombin generation assays: Inventory of thrombin generation methods based on results of an International Society of Thrombosis and Haemostasis Scientific Standardization Committee survey. J Thromb Haemost. 2020; 18(8):1893−1899. DOI: 10.1111/ jth.14863.Rudez G, Meijer P, Spronk HM, et al. Biological variation in inflammatory and hemostatic markers. J Thromb Haemost. 2009; 7(8):1247−1255. DOI: 10.1111/j.1538- 7836.2009.03488.x.Rudez G, Meijer P, Spronk HM, et al. Biological variation in inflammatory and hemostatic markers. J Thromb Haemost. 2009; 7(8):1247−1255. DOI: 10.1111/j.1538- 7836.2009.03488.x.Mairesse A, Bayart JL, Desmet S, et al. Biological variation data and analytical specification goal estimates of the thrombin generation assay with and without thrombomodulin in healthy individuals. Int J Lab Hematol. 2021; 43(3):450−457. DOI: 10.1111/ijlh.13388.Mairesse A, Bayart JL, Desmet S, et al. Biological variation data and analytical specification goal estimates of the thrombin generation assay with and without thrombomodulin in healthy individuals. Int J Lab Hematol. 2021; 43(3):450−457. DOI: 10.1111/ijlh.13388.Wu J, Zhao HR, Zhang HY, et al. Thrombin generation increasing with age and decreasing with use of heparin indicated by calibrated automated thrombogram conducted in Chinese. Biomed Environ Sci. 2014; 27(5):378−384. DOI: 10.3967/bes2014.063.Wu J, Zhao HR, Zhang HY, et al. Thrombin generation increasing with age and decreasing with use of heparin indicated by calibrated automated thrombogram conducted in Chinese. Biomed Environ Sci. 2014; 27(5):378−384. DOI: 10.3967/bes2014.063.Haidl H, Cimenti C, Leschnik B, et al. Agedependency of thrombin generation measured by means of calibrated automated thrombography (CAT). Thromb Haemost. 2006; 95(5):772−775.Haidl H, Cimenti C, Leschnik B, et al. Agedependency of thrombin generation measured by means of calibrated automated thrombography (CAT). Thromb Haemost. 2006; 95(5):772−775.Kausche LE, Adler W, Zimmermann R, et al. Thrombin Generation in Fresh and Frozen-Thawed Platelet Poor Plasma — Is there a Difference? Clin Lab. 2020; 66(6). DOI: 10.7754/Clin.Lab.2019.190834.Kausche LE, Adler W, Zimmermann R, et al. Thrombin Generation in Fresh and Frozen-Thawed Platelet Poor Plasma — Is there a Difference? Clin Lab. 2020; 66(6). DOI: 10.7754/Clin.Lab.2019.190834.Mori F, Genuardo C, Nannizzi S, et al. Intra— and interassay variations of two thrombin generation methods. Int J Lab Hematol. 2021; 43(4):O218—O220. DOI: 10.1111/ijlh.13524.Mori F, Genuardo C, Nannizzi S, et al. Intra— and interassay variations of two thrombin generation methods. Int J Lab Hematol. 2021; 43(4):O218—O220. DOI: 10.1111/ijlh.13524.Chandler WL, Roshal M. Optimization of plasma fluorogenic thrombin-generation assays. Am J Clin Pathol. 2009; 132(2):169−179. DOI: 10.1309/ AJCP6AY4HTRAAJFQChandler WL, Roshal M. Optimization of plasma fluorogenic thrombin-generation assays. Am J Clin Pathol. 2009; 132(2):169−179. DOI: 10.1309/ AJCP6AY4HTRAAJFQKintigh J, Monagle P, Ignjatovic V. A review of commercially available thrombin generation assays. Res Pract Thromb Haemost. 2017; 2(1):42−48. DOI: 10.1002/ rth2.12048.Kintigh J, Monagle P, Ignjatovic V. A review of commercially available thrombin generation assays. Res Pract Thromb Haemost. 2017; 2(1):42−48. DOI: 10.1002/ rth2.12048.Dargaud Y, Wolberg AS, Luddington R, et al. Evaluation of a standardized protocol for thrombin generation measurement using the calibrated automated thrombogram: an international multicentre study. Thromb Res. 2012; 130(6):929−934. DOI: 10.1016/j. thromres.2012.07.017.Dargaud Y, Wolberg AS, Luddington R, et al. Evaluation of a standardized protocol for thrombin generation measurement using the calibrated automated thrombogram: an international multicentre study. Thromb Res. 2012; 130(6):929−934. DOI: 10.1016/j. thromres.2012.07.017.

The authors declare that there are no conflicts of interest present.