Адаптация методики определения изменения митохондриального мембранного потенциала в клетках C2C12 с использованием готового набора «Mitochondrial Membrane Potential Kit» (Sigma-Aldrich)
https://doi.org/10.18705/2311-4495-2024-11-1-45-54
EDN: AXQBHV
Аннотация
В статье представлены результаты адаптации методики определения изменений митохондриального мембранного потенциала (MMP) в клетках С2С12 с использованием готового набора «Mitochondrial membrane Potential Kit» производства Sigma-Aldrich (каталожный номер MAK159) для исследования на микропланшетном ридере и флуоресцентном микроскопе. Подобраны условия для проведения измерения, необходимые разведения для получения оптимальной концентрации для измерения MMP в клетках мышиных миобластов С2С12. Проведено сравнение правильности выполнения исследования с использованием флуоресцентного красителя TMRE (этилового эфира тетраметилродамина).
Актуальность. При использовании готового набора «Mitochondrial membrane Potential Kit» (Sigma-Aldrich) мы столкнулись с тем, что в руководстве пользователя производитель не указывает концентрацию JC-10 и дает лишь общие рекомендации по использованию красителя, не учитывающие тип клеток, размер, плотность, разницу во времени инкубации для различных культур клеток.
Цель работы. Адаптировать методику определения МMП (митохондриальный мембранный потенциал) в клетках С2С12 с использованием набора для исследования на микропланшетном ридере и электронном микроскопе.
Материалы и методы. ММП в клетках С2С12 измерялся двумя методами: с помощью флуоресцентной микроскопии (Zeiss, программа Zen) и с использованием планшетного флуориметра (CLARIOstar (BMG LABTECH). В качестве флуоресцентных зондов использовались красители JC-10, TMRE (Sigma-Aldrich).
Результаты. Были подобраны оптимальные условия для регистрации изменения митохондриального мембранного потенциала в клетках С2С12. Достоверные и воспроизводимые результаты были получены при 100-кратном разведении раствора красителя для загрузки JC-10 (Dye Loading Solution) и замене стандартного буфера производителя на стандартный натрий-фосфатный буфер (рН = 7,4).
Заключение. При использовании готовых наборов для измерения ММП методика, предложенная производителем, может не подходить для выбранной клеточной линии. В нашем случае при исследовании мышиных миобластов линии С2С12 оптимальным оказалось разведение красителя для загрузки в 100 раз по сравнению с рекомендованным производителем.
Об авторах
Ю. А. ВласоваРоссия
Юлия Александровна Власова, к. б. н., старший научный сотрудник
НИЛ молекулярного и клеточного моделирования и генной терапии
197341; ул. Аккуратова, д. 2; Санкт-Петербург
Е. С. Клименко
Россия
Екатерина Сергеевна Клименко, младший научный
сотрудник
НИЛ молекулярного и клеточного моделирования и генной терапи
Санкт-Петербург
К. С. Сухарева
Россия
Ксения Сергеевна Сухарева, PhD, младший научный сотрудник
НИЛ молекулярного и клеточного моделирования и генной терапии
Санкт-Петербург
Л. С. Гаврилова
Россия
Лидия Сергеевна Гаврилова, магистрант
Институт медицинского образования
Санкт-Петербург
А. А. Костарева
Россия
Анна Александровна Костарева, д. м. н., директор Института, профессор
Институт молекулярной биологии и генетики; Институт медицинского образования; кафедра факультетской терапии с клиникой
Санкт-Петербург
Список литературы
1. Zorova LD, Popkov VA, Plotnikov EJ, et al. Functional Significance of the Mitochondrial Membrane Potential. Biochem. Moscow Suppl. Ser. A. 2018; (12): 20–26. DOI: 10.1134/S1990747818010129.
2. Perry SW, Norman JP, Barbieri J, et al. Mitochondrial membrane potential probes and the proton gradient: a practical usage guide. Biotechniques. 2011;50(2):98–115. DOI: 10.2144/000113610.
3. Mathur A, Hong Y, Kemp BK, et al. Evaluation of fluorescent dyes for the detection of mitochondrial membrane potential changes in cultured cardiomyocytes. Cardiovasc Res. 2000;46(1):126–38. DOI: 10.1016/s0008-6363(00)00002-x.
4. Buckman JF, Reynolds IJ. Spontaneous changes in mitochondrial membrane potential in cultured neurons. J Neurosci. 2001;21(14):5054–65. DOI: 10.1523/JNEUROSCI.21-14-05054.2001.
Рецензия
Для цитирования:
Власова Ю.А., Клименко Е.С., Сухарева К.С., Гаврилова Л.С., Костарева А.А. Адаптация методики определения изменения митохондриального мембранного потенциала в клетках C2C12 с использованием готового набора «Mitochondrial Membrane Potential Kit» (Sigma-Aldrich). Трансляционная медицина. 2024;11(1):45-54. https://doi.org/10.18705/2311-4495-2024-11-1-45-54. EDN: AXQBHV
For citation:
Vlasova Yu.A., Klimenko E.S., Sukhareva K.S., Gavrilova L.S., Kostareva A.A. Adaptation of the technique of determination of mitochondrial membrane potential change in C2C12 cells using the ready set “Mitochondrial Membrane Potential Kit” (Sigma-Aldrich). Translational Medicine. 2024;11(1):45-54. (In Russ.) https://doi.org/10.18705/2311-4495-2024-11-1-45-54. EDN: AXQBHV